组蛋白泛素化作为关键的翻译后修饰，在基因表达调控、DNA修复、细胞周期调控及癌症发展中发挥重要作用。高质量的样本前处理是获得可靠实验数据的前提，能有效保护低丰度泛素化信号，并提高质谱或免疫学分析的准确性和重复性。

一、样本选择与处理原则

组蛋白泛素化研究可涉及多种生物样本，包括细胞、组织及血液或外泌体等特殊样本。

1、细胞样本

常用哺乳动物细胞如HEK293、Hela或干细胞，其核酸含量高，便于染色质提取。细胞收获后应快速低温操作，并加入蛋白酶抑制剂和去泛素化酶抑制剂（如NEM），保护组蛋白及其泛素化状态。

2、组织样本

新鲜或冷冻组织需快速液氮研磨，以防止泛素化修饰降解。对于低起始量样本，可优化裂解缓冲液和处理策略，保证泛素化信号的完整性。

3、处理原则

• 全程低温操作（4℃或液氮冷冻）。
• 添加蛋白酶及去泛素化酶抑制剂。
• 选择合适的裂解缓冲液，兼顾细胞裂解效率和蛋白稳定性。

二、组蛋白提取方法

组蛋白提取是前处理核心环节。常用方法包括酸性提取、核提取-盐梯度法和商业化试剂盒。

1、酸性提取法

利用组蛋白在强酸条件下可溶解的特性，将组蛋白从核沉淀中释放出来，操作简单、回收率高。但需注意酸性条件可能对某些泛素化修饰造成影响。

2、核提取-盐梯度法

通过高盐提取核蛋白，可保留染色质结构和泛素化位点的天然状态，适合下游免疫富集和质谱分析。

3、 商业化试剂盒

提供标准化操作流程，减少实验差异。百泰派克生物科技还可提供优化使用指导和定制化样本处理方案。

三、组蛋白泛素化肽段富集策略

泛素化修饰丰度低，富集步骤对于后续分析至关重要。

1、抗体免疫沉淀

使用H2AK119Ub或H2BK120Ub抗体捕获特定修饰的组蛋白或肽段，可与质谱结合，实现高灵敏检测。

2、泛素残基标记法（diGly富集）

泛素连接赖氨酸残基后，酶解保留diGly残基，通过抗diGly抗体富集，可显著提高低丰度泛素化肽段的检测率，是现代组蛋白泛素化质谱研究主流方法。

四、组蛋白泛素化样本前处理的质量控制

• 高质量的前处理还需严格的质量控制。
• 蛋白浓度测定：通过BCA或Bradford方法保证输入量适合富集与质谱分析。
• SDS-PAGE分析：检查组蛋白提取完整性及是否降解，可结合泛素化抗体评估修饰保留情况。
• 小规模质谱预检测：确认泛素化肽段可检测，为大规模分析提供参考。

组蛋白泛素化样本前处理是解析这一关键翻译后修饰的基础环节。通过科学选择样本类型、提取方法和富集策略，并结合严格质量控制，可以最大限度保留泛素化信号，保证后续分析准确性。借助百泰派克生物科技的高分辨质谱平台与定制化组蛋白组学服务，研究者能够高效、可靠地获得泛素化数据，从而深入揭示其在基因调控、DNA修复及疾病机制中的作用，为生命科学研究和表观遗传药物开发提供坚实支撑。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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