组蛋白琥珀酰化（histone succinylation）作为新型表观遗传修饰，在基因表达调控、代谢信号传导和疾病研究中具有重要意义。由于琥珀酰化修饰肽段通常丰度低、易受降解，其检测对样本前处理提出了高要求。前处理环节的优化直接决定 LC-MS/MS 或免疫检测的准确性和灵敏度。

一、组蛋白琥珀酰化样本前处理的重要性

1、保证修饰完整性

组蛋白赖氨酸上的琥珀酰基易受酸碱、温度和酶活性影响而脱落。有效的样本前处理可以保护修饰，确保检测结果可靠。

2、提高检测灵敏度

低丰度修饰肽段在复杂蛋白混合物中容易被掩盖。通过前处理富集目标蛋白及肽段，可显著提高 LC-MS/MS 或免疫检测的信噪比。

3、减少干扰物质

细胞裂解液、核酸和盐分等杂质会影响色谱分离和质谱信号。前处理可去除这些干扰，保证实验的重复性和可比性。

二、组蛋白琥珀酰化样本前处理的总体流程

组蛋白琥珀酰化前处理通常包括：细胞或组织裂解、组蛋白提取、蛋白定量、酶解与肽段净化、肽段富集等关键环节。

1、样品裂解

（1）选择适宜缓冲液

常用高盐缓冲液（如 0.4–0.5 M HCl 或 0.2–0.4 M NaCl）可有效提取核蛋白，同时减少组蛋白降解。酸性缓冲液有助于溶解组蛋白，但需控制处理时间，避免琥珀酰化脱落。

（2）加入抑制剂

为防止蛋白酶降解和去修饰酶活性，应添加蛋白酶抑制剂、去乙酰化酶抑制剂和去琥珀酰化酶抑制剂（如 nicotinamide、sirtuin 抑制剂）。

（3）保持低温操作

全程 4°C 或冰上操作，最大程度保护组蛋白修饰稳定性。

2、组蛋白提取

（1）酸性提取法

使用 0.2-0.4 M H₂SO₄ 或 HCl 提取组蛋白，随后通过乙醇沉淀或超滤浓缩。此方法能够高效富集 H1、H2A、H2B、H3、H4 等组蛋白亚型。

（2）盐提取法

高盐缓冲液可选择性提取核蛋白，适用于结合后续酶解和质谱分析的实验设计。

（3）去除杂质

通过多次离心或超滤去除 DNA、RNA 和小分子代谢物，减少后续色谱和质谱干扰。

3、蛋白定量与质量检测

在进行酶解前，需准确测定蛋白浓度，保证酶解条件可控。常用方法包括 BCA 法和 Bradford 法。同时，可通过 SDS-PAGE 检查组蛋白提取效果，确保各组蛋白亚型完整。

4、酶解与肽段制备

（1）酶选择

胰蛋白酶（trypsin）常用于琥珀酰化肽段酶解，但由于组蛋白赖氨酸和精氨酸丰富，单独胰蛋白酶可能产生过短肽段。可结合 Lys-C 或 Arg-C 联合消化，提高肽段覆盖率。

（2）保护修饰

酶解过程中，需添加抑制剂或调节 pH，以防止琥珀酰化脱落。

（3）肽段净化

通过固相萃取（SPE）去除盐分和小分子杂质，为 LC-MS/MS 检测提供干净样品。

5、琥珀酰化肽段富集

（1）免疫亲和富集

利用特异性琥珀酰化抗体捕获肽段，可显著提高低丰度修饰检测灵敏度。

（2）化学富集策略

通过特异化学标记结合亲和捕获，可进一步提高肽段覆盖度。

（3）多步富集

在复杂样品中，多步富集策略可最大化琥珀酰化肽段回收，同时降低背景干扰。

三、组蛋白琥珀酰化样本前处理环节的关键注意事项

1、温度与时间控制

样品裂解和提取需低温操作，避免高温导致修饰脱落。

2、pH 调节

酸性或碱性环境过强，易导致琥珀酰化水解或蛋白变性，需精确调节缓冲液浓度。

3、抑制酶活性

去琥珀酰化酶活性会导致修饰丢失，前处理全程加入抑制剂可有效保护琥珀酰化。

4、样品一致性

多个样本需统一处理流程，以保证数据可比性和重复性。

组蛋白琥珀酰化样本前处理是高质量检测的关键环节，直接影响 LC-MS/MS 或免疫检测的灵敏度和可靠性。通过优化样品裂解、组蛋白提取、肽段酶解与富集策略，科研人员可以获得完整、稳定的琥珀酰化肽段，准确解析其分布和动态变化。百泰派克生物科技凭借成熟的前处理技术、专业质谱平台和全流程服务，为科研团队提供可靠的组蛋白琥珀酰化研究支持，助力基础研究和应用探索，为精准表观遗传学和代谢相关疾病研究提供坚实保障。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

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